右美托咪定对胎鼠宫内缺血缺氧性脑损伤的神
张玥琪 刘志强 沈富毅
上海，同济大学附属第一妇婴保健院麻醉科（张玥琪、刘志强、沈富毅）
国际麻醉学与复苏杂志,,):-.
DOI：10./cma.j.issn.-..10.
基金项目：上海市卫生局青年科研项目
（y）；
上海市卫生和计划生育委员会青年基金
（Y）
ORIGINALARTICLES
本研究拟采用大鼠宫内缺血/缺氧模型，研究母体Dex预处理对仔鼠大脑的神经保护作用。
1 材料与方法
1.1 方 法
1.1.1 宫内缺血/缺氧动物模型制作
孕19dSD大鼠经2%戊巴比妥钠麻醉，剂量0.25ml/g。下腹正中切口切开腹部，暴露双侧子宫动脉，用4个微小动脉夹分别夹闭双侧子宫动脉，15min后恢复血供。
1.1.2 分组及处理
45只SD孕鼠采用完全随机法分成假手术组、缺血/缺氧组、Dex组，共3组，每组15只。假手术组开腹暴露双侧子宫动脉，不予钳夹。缺血/缺氧组与Dex组按前述模型制作方法行手术。假手术组与缺血/缺氧组于术前0.5h经腹腔注射生理盐水5ml，Dex组按10μg/kg（母体）剂量于术前0.5h经腹腔缓慢注射Dex溶液（药物浓度4mg/L）。
1.1.3 标本提取
母鼠自然分娩后，取一半数量的存活新生1d仔鼠迅速断头，于显微镜下剥取全脑置于多聚甲醛溶液中固定7~10d，然后更换蔗糖溶液脱水3d。处理后的全脑取出，选取海马区制作冰冻切片。另一半仔鼠则于冰上取脑海马并将组织置于裂解液中［蛋白酶抑制剂∶放射免疫沉淀（radio-immunoprecipitationassay，RIPA）=1∶］，2h后超声打碎，离心取上清液，然后进行二喹啉甲酸（ｂicinchoninicacid，BCA）蛋白分析法定量，最后统一样品浓度，煮沸5min，于－80℃保存样品。
1.2 观察指标
1.2.1 新生仔鼠死亡率。
1.2.2 TUNEL染色观察细胞凋亡。
2 结 果
2.1 新生仔鼠死亡率
假手术组0（0/），Dex组13.3%（12/90），缺血/缺氧组43.2%（48/）。3组新生仔鼠死亡率差异有统计学意义（χ2=65.96，P0.05），缺血/缺氧组死亡率高于Dex组（χ2=21.23，P0.05）。
2.2 细胞凋亡情况
假手术组与Dex组新生仔鼠脑海马区几乎未见绿染的凋亡细胞，缺血/缺氧组海马区有小片绿染的凋亡细胞（图1）。
3组阳性细胞数占细胞总数的比例分别为假手术组0（0/）、Dex组0（0/）、缺血/缺氧组8.5%（/）。结果显示3组阳性细胞数比例差异有统计学意义（χ2=.01，P0.05），缺血/缺氧组阳性细胞数比例高于假手术组（χ2=.79，P0.05）及Dex组（χ2=.04，P0.05）。
2.3 caspase-3结果
3组caspase-3蛋白灰度值单样本Kolmogorov-Smirnov正态性检验显示假手术组P=0.48，Dex组P=0.88，缺血/缺氧组P=0.95，可认为近似正态分布。3组单因素方差分析F=6.42，P=0.01，显示caspase-3蛋白表达的组间均数差异有统计学意义。LSD法多重比较结果显示，假手术组与Dex组caspase-3蛋白表达的组间差异无统计学意义（P0.05），缺血/缺氧组caspase-3蛋白表达低于假手术组及Dex组，组间差异有统计学意义（P0.05，表1、图2）。
3 讨 论
在针对成年动物及新生啮齿类动物脑缺血模型的研究中显示，Dex可减少动物全脑缺血或局灶性脑缺血后神经细胞死亡，改善神经功能预后。此外，Dex对麻醉药诱导的发育脑神经毒性也有保护作用。本研究以“母体-胎儿单位”为研究对象，发现通过母体Dex预处理可减少仔鼠海马区神经元凋亡，为宫内缺血/缺氧胎鼠提供神经保护作用。研究使用的Dex剂量为10μg/kg（母体），该剂量综合参考了Su等和Sanders等的研究，术前0.5h采用腹腔注射的方式给药（参考贾莉莉等的研究），腹膜具有较强的吸收能力，通常每小时可吸收动物体重3%~8%的液体，0.5h可保证药物充分吸收。
缺血/缺氧性脑损伤的干预时机对预后非常重要，通常中重度的损伤会先后经历原发性损伤（缺血后4~6h）和继发性损伤（6~72h），且以后者更为剧烈而持久，一般认为二次能量衰竭间期是实施神经保护措施的最佳时机即治疗时间窗口期，在人类新生儿通常为6h。本研究通过母体预处理，希望通过在更早的时间即原发性损伤发生之前进行干预，以减少缺血/缺氧对胎儿带来的损伤，其结果对临床实践而言会更有指导意义。
我们尚无法阐明Dex神经保护作用的确切通路，因为这涉及到药物的胎盘代谢和药物对母胎可能存在的药效动力学差异，这也是现有的相关研究鲜少涉足该领域的原因。我们在今后的研究中会更深层地涉及机制的探索，也会进一步通过动物行为学测试来研究Dex对远期学习认知功能的作用。
国际麻醉学与复苏杂志
主管：中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
主办：中华医学会徐州医科大学
ISSN：-CN:32-/R
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